日光诱导荧光提取算法

㈠ 低荧光强度ret比值算法

根据荧光的强度，将散点图划分为三个RET区，并计算各区中某细胞总数的比率。
低荧光比率：LFR = 1000 - HFR - MFR。
RET=此细胞/（成熟细胞+此细胞）。

㈡ 荧光补偿算法有哪些

荧光灯带补偿是指对荧光灯进行了电容补偿。
因为电力系统的用电设备通常都是感性负载，在使用时会产生感性电流，这部分电流对外部电路不做功，主要是用于建立磁场进行电能和磁能之间的能量转换。由这部分电流产生的功率叫无功功率，它会使电源的容量使用效率降低也就是功率因数降低。通过在系统中适当地增加电容的方式（并联补偿电容器）就可以得以改善。

㈢ 叶绿素荧光参数npq计算

叶绿素荧光参数是一组用于描述植物光合作用机理和光合生理状况的变量或常数值，反映了植物“内在性 ”的特点 ， 被视为是研究植物光合作用与环境关系的内在探针 。现常用于分析叶绿素荧光参数的技术称叶绿素荧光动力学技术，其在测定叶片光合作用过程中光系统对光能的吸收、传递、耗散、分配等方面具有独特的作用，该技术被称为研究植物光合功能的快速、无损伤探针，已逐渐在环境胁迫对植物光合作用影响研究方面得到应用。叶绿素荧光技术通常有调制和非调制两种。调制叶绿素荧光测定技术，是利用具有一定的调制频率和强度的光源诱导，通过饱和脉冲分析方法，使叶绿素荧光发射快速地处于某些特定状态，以进行相应荧光检测的技术。即其激发荧光的测量光具有一定的调制（开/关）频率，检测器只记录与测量光同频的荧光，因此调制荧光仪允许测量所有生理状态下的荧光；打开一个持续时间很短（一般小于1 s）的强光关闭所有的电子门（光合作用被暂时抑制），从而使叶绿素荧光达到最大。该技术方便野外观测之用。可恢复的最大荧光产量，它的获得是在荧光P峰和M峰后，当开放的PSⅡ最大荧光产量平稳时，关闭作用光得到F0’后，把饱和光的闪光间隔期延长到180s/次，得到一组逐渐增大(对数增长)的最大荧光产量，将该组最大荧光产量放在半对数坐标系中即成直线，该直线在Y轴的截距即为Fmr。以(Fm-Fmr)/Fmr可以反映不可逆的非光化学淬灭产率，即发生光抑制的可能程度。

㈣ 荧光分析系统基本操作

在石油勘探开发过程中，地质岩心的荧光发光现象是初步判断油气显示层段的最简便、最直观实用的重要标准之一。岩心是可反复使用的宝贵实物资料，经过多次观察和取样分析后，其表面的油气会逐渐逸出、挥发，或岩心本身逐渐被腐蚀、风化甚至破坏，无法再现取心时的荧光情形。因此，岩心刚出筒时的物性、含油性特征原态永久性保存显得尤为重要。目前大部分油田进行地质岩心的荧光图像采集时，采用简易的荧光照相技术，得到的荧光图像所反映的岩心荧光特性的误差较大。荧光录井常用的常规荧光检测仪也往往只能依靠肉眼观察，根据个人经验对岩心样品的荧光效应进行描述、判断和分析，分析结果带有较大的主观性。因此无论是岩心库荧光照相或是常规的岩心荧光录井，均存在主观误差较大、设备简陋、紫外线伤害等缺点。

荧光检测技术在近年内发展迅速，为弥补常规荧光检测仪器的不足，国内外研制了各式各样的定量荧光分析仪及应用荧光显微技术，从微观角度对含油荧光进行定量分析。四川大学研制的宏观岩心荧光图像信息系统则是从宏观角度整体上检测岩心荧光，及时获取岩心出筒时的物性、含油性特征原态，在储集层含油评价中显示了独特的优势，并在对荧光图像资料进行含油级别和含油性质进行分析评价时，为荧光检测及其定性与定量分析提供了一种新的技术手段，方便了对岩心荧光图像和其他资料进行综合管理和应用，可指导油气田的进一步钻探与开发。

含油岩石在紫外光的照射下会激发出荧光，根据荧光的面积、荧光强度来初步确定岩石的含油性，分析内容包括含油面积、无油面积、含油面积率、无油面积率、荧光强度和评级结果。常规荧光分析中将含油级别粗分为五级:油砂、含油、油浸、油斑、油迹。细分为7级:含油饱满油砂、不饱满油砂、含油砂岩、油浸砂岩、油斑砂岩、油迹砂岩、不含油砂岩。荧光分析系统能够通过前面介绍的图像处理算法自动分析荧光扫描图像中含油面积、荧光强度等参数，并根据参数进行自动评价。

岩心荧光分析系统能及时采集清晰的岩心荧光图像，真实直观地反映了岩心含油的实际情况，以图像文件的形式保存，建立了岩心荧光综合图文库和管理应用系统，为永久性保存岩心的含油气现象和特征提供了有效的工具，为今后的勘探开发研究、分析和应用含油气岩心资料提供了完整、清晰的数字化图像。通过对荧光图像参数特征的研究，利用荧光图像饱和度与丰度曲线，为荧光检测提供了定性和定量分析;综合应用岩心荧光图像资料和其他资料进行含油气评价，可直接提高地质录井油气综合评价的信息化、定量化程度。

1.读图

用鼠标单击文件菜单后，先选择读图方式，即“网络读图”或者“本地读图”。如果是“网络读图”，点击“读图像”，图文浏览库中的岩心图像和图像信息进行动态导入，分析结果能上传至服务器;如果是“本地读图”，在点击“读图像”命令后会弹出文件选择框，在文件选择框里选择所要读入的图像，如图5-68所示。

图5-68 打开文件

2.图像预处理

图像预处理的作用是提高图像质量，为提出准确图像目标打下基础。

3.设置处理框

图像处理框是用来设置图像分析区域的，如图5-69所示。

图5-69 设置处理框

4.荧光图像目标提取

如图5-70所示。

图5-70 目标提取

5.图像目标修改增强

可用特征提取或者手工修改，使提取目标更加准确。

6.成分分析

在分割图像后则可对分割出来的目标进行沥青质分类操作。沥青质分类有粗分和细分两种。点击菜单中的“粗分”则对图像目标进行粗分，同样点击“细分”进行进一步细分。如果认为“粗分”和“细分”的效果还不够理想，则可启用人工交互分类，如图5-71所示。

图5-71 成分分析

图5-72 数据浏览

7.参数计算

选中菜单中的参数计算，系统将自动统计出分析数据。

8.数据浏览

选中“查看”菜单中的“数据浏览”命令，弹出“数据浏览”对话框，从中便可浏览和修改分析数据。操作如图5-72所示。

9.报表预览和数据保存

选中菜单中的数据浏览项，弹出“数据浏览”对话框，便可浏览和修改分析数据。选择报表预览中“另存为”中的不同保存格式，即可将报表数据保存在分析员指定的位置，如图5-73所示。

单块岩心荧光图像分析

图5-73 荧光报表

㈤ 毛细管电泳激光诱导荧光原理是什么谢谢

建立了毛细管电泳�激光诱导荧光检测(CE�LIFD)技术测定人血浆中富马酸比索洛尔含量的新方法。选用荧光素异硫氰酸酯（FITC）为衍生化试剂，当缓冲溶液为25 mmol/L Na2B4O7（pH 9.2）、分离电压25 kV、柱温20 ℃、电动进样（10 kV×8 s）、以峰面积内标法定量、于激发波长/发射波长= 488/520 nm柱上检测时，富马酸比索洛尔得到较好分离。在选定的电泳条件下，对其线性范围(20～1000 μg/L)、检出限(10 μg/L)、重现性(日内和日间精密度分别小于4.44%和5.59%)和回收率（96.19％～101.80％）进行了测定。结果表明： 迁移时间的重现性＜1.58%；峰面积之比的重现性＜6%。

准确称取富马酸比索洛尔和酒石酸美托洛尔各5 mg，加水溶解，分别定容至50 mL，配制成100 mg/L 标准储备液，4 ℃冰箱放置，备用。

准确称取5 mg FITC溶于5 mL乙腈中，配制成2.5 mmol/L储备液，临用前用乙腈稀释至所需浓度。

2.3 空白血浆的制备

健康人空腹，于肘静脉处取血，放于装有肝素钠抗凝剂的离心管中，30 ℃静置，然后以3000 r/min 离心10 min，取上清液于另一离心管中，－20 ℃冰箱中冷藏备用。

2.4 生物样品前处理

取肝素化的含药血浆1 mL，置10 mL 离心管中，同时加入20 μL 内标溶液，加0.2 g NaCl及50 μL浓氨水，旋涡振荡30 s 后，加入醋酸乙酯3.0 mL。为防止乳化现象,于室温下静置2 min 后，再用快速混匀仪混旋提取1 min，以3000 r/min 离心3 min，移取上层有机层至另一离心管中，40 ℃下N2 流吹干，得富马酸比索洛尔和内标的残留物。

2.5 荧光衍生化反应

在上述残留物中加入0．5 mmol/L FITC 乙腈液400 μL，再加入200 mmol/L Na2HPO4水溶液200 μL和400 μL水，室温，暗处放置过夜。衍生后产物用水稀释至2 mL，上机分离。

2.6 实验方法

将血样进行预处理，以FITC为衍生化试剂，考察影响衍生化的重要因素，并用美托洛尔为内标物，确定富马酸比索洛尔衍生物与其分离的最佳电泳条件。实验前，缓冲液超声脱气10 min，每天开机时分别用0.1 mol/L NaOH、超纯水、缓冲液冲洗毛细管柱3 min，运行5次后更换新的缓冲液，以确保分析结果的重现性。

希望能对你有帮助

㈥ 如何去除荧光定量pcr 中的背景值

背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60°C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文件中。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件，从实验数据中扣除背景信号。
什么是纯荧光校正，多长时间校正一次：
纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度，通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中，SDS软件收集样品的原始光谱信号，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较，精确扣除不同染料的信号重叠部分，从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。
推荐每半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前，请先进行背景校正和ROI校正。

㈦ 请问叶绿素荧光测定的原理及其意义

叶绿素荧光现象是由传教士Brewster首次发现的。1834年Brewster发现，当一束强太阳光穿过月桂叶子的乙醇提取液时，溶液的颜色变成了绿色的互补色¬¬——红色，而且颜色随溶液的厚度而变化，这是历史上对叶绿素荧光及其重吸收现象的首次记载。后来，Stokes（1852）认识到这是一种光发射现象，并使用了“fluorescence”一词。1874年，Müller发现叶绿素溶液稀释后，荧光强度比活体叶子的荧光强得多。尽管Müller提出叶绿素荧光和光合作用之间可能存在相反的关系，但由于他的实验没有对照，实验条件控制不严格，因此人们并没有将叶绿素荧光诱导（瞬变）现象的发现归功于Müller。
Kautsky是公认的叶绿素荧光诱导现象的发现者。1931年，Kautsky和Hirsch用肉眼观察并记录了叶绿素荧光诱导现象(Lichtenthaler，1992；Govindjee，1995)。他们将暗适应的叶子照光后，发现叶绿素荧光强度随时间而变化，并与CO2的固定有关（图3.1）。他们得到的主要结论如下：1）叶绿素荧光迅速升高到最高点，然后下降，最终达到一稳定状态，整个过程在几分钟内完成。2）曲线的上升反映了光合作用的原初光化学反应，不受温度（0℃和30℃）和HCN处理的影响。若在最高点时关掉光，则荧光迅速下降。3）荧光强度的变化与CO2的固定呈相反的关系，若荧光强度下降，则CO2固定增加。这说明当荧光强度降低时，较多的光能用于转变成化学能。4）奇怪的是（照光后）CO2的固定有一个延滞期，似乎说明“光依赖”的过程对CO2固定过程的进行是必需的。另一个未得到解释的现象是若在荧光诱导结束后关掉光，则荧光水平的恢复需要很长时间。在Kautsky的发现之后，人们对叶绿素荧光诱导现象进行了广泛而深入的研究，并逐步形成了光合作用荧光诱导理论，被广泛应用于光合作用研究。由于Kautsky的杰出贡献，叶绿素荧光诱导现象也被称为Kautsky效应（Kautsky Effect）。
1983年，WALZ公司首席科学家，德国乌兹堡大学教授Ulrich Schreiber博士利用调制技术和饱和脉冲技术，设计制造了全世界第一台脉冲振幅调制（Pulse-Amplitude-Molation，PAM）荧光仪——PAM-101/102/103。
所谓调制技术，就是说用于激发荧光的测量光具有一定的调制（开/关）频率，检测器只记录与测量光同频的荧光，因此调制荧光仪允许测量所有生理状态下的荧光，包括背景光很强时。正是由于调制技术的出现，才使得叶绿素荧光由传统的“黑匣子”（避免环境光）测量走向了野外环境光下测量，由生理学走向了生态学。
所谓饱和脉冲技术，就是打开一个持续时间很短（一般小于1 s）的强光关闭所有的电子门（光合作用被暂时抑制），从而使叶绿素荧光达到最大。饱和脉冲（Saturation Pulse, SP）可被看作是光化光的一个特例。光化光越强，PS II释放的电子越多，PQ处累积的电子越多，也就是说关闭态的电子门越多，F越高。当光化光达到使所有的电子门都关闭（不能进行光合作用）的强度时，就称之为饱和脉冲。
打开饱和脉冲时，本来处于开放态的电子门将该用于光合作用的能量转化为了叶绿素荧光和热，F达到最大值。
经过充分暗适应后，所有电子门均处于开放态，打开测量光得到Fo，此时给出一个饱和脉冲，所有的电子门就都将该用于光合作用的能量转化为了荧光和热，此时得到的叶绿素荧光为Fm。根据Fm和Fo可以计算出PS II的最大量子产量Fv/Fm=(Fm-Fo)/Fm，它反映了植物的潜在最大光合能力。
在光照下光合作用进行时，只有部分电子门处于开放态。如果给出一个饱和脉冲，本来处于开放态的电子门将该用于光合作用的能量转化为了叶绿素荧光和热，此时得到的叶绿素荧光为Fm’。根据Fm’和F可以求出在当前的光照状态下PS II的实际量子产量Yield=ΦPSII=ΔF/Fm’=(Fm’-F)/Fm’，它反映了植物目前的实际光合效率。
在光照下光合作用进行时，只有部分电子门处于关闭态，实时荧光F比Fm要低，也就是说发生了荧光淬灭（quenching）。植物吸收的光能只有3条去路：光合作用、叶绿素荧光和热。根据能量守恒：1=光合作用+叶绿素荧光+热。可以得出：叶绿素荧光=1－光合作用－热。也就是说，叶绿素荧光产量的下降（淬灭）有可能是由光合作用的增加或热耗散的增加引起的。由光合作用的引起的荧光淬灭称之为光化学淬灭（photochemical quenching, qP）；由热耗散引起的荧光淬灭称之为非光化学淬灭（non-photochemical quenching, qN或NPQ）。光化学淬灭反映了植物光合活性的高低；非光化学淬灭反映了植物耗散过剩光能为热的能力，也就是光保护能力。
光照状态下打开饱和脉冲时，电子门被完全关闭，光合作用被暂时抑制，也就是说光化学淬灭被全部抑制，但此时荧光值还是比Fm低，也就是说还存在荧光淬灭，这些剩余的荧光淬灭即为非光化学淬灭。淬灭系数的计算公式为：qP=(Fm’-Fs)/Fv’=1-(Fs-Fo’)/(Fm’-Fo’)；qN=(Fv-Fv’)/Fv=1-(Fm’-Fo’)/(Fm-Fo)；NPQ=(Fm-Fm’)/Fm’=Fm/Fm’-1。
当F达到稳态后关闭光化光，同时打开远红光（Far-red Light, FL）（约持续3－5 s），促进PS I迅速吸收累积在电子门处的电子，使电子门在很短的时间内回到开放态，F回到最小荧光Fo附近，此时得到的荧光为Fo’。由于在野外测量Fo’不方便，因此野外版的调制荧光仪（除PAM-2100和WATER-PAM）外，多数不配置远红光。此时可以直接利用Fo代替Fo’来计算qP和qN，尽管得到的参数值有轻微差异，但qP和qN的变化趋势与利用Fo’计算时是一致的。由于NPQ的计算不需Fo’，近10几年来得到了越来越广泛的应用。
根据PS II的实际量子产量ΔF/Fm’和光合有效辐射（Photosynthetically Active Radiation, PAR）还可计算出光合电子传递的相对速率rETR=ΔF/Fm’·PAR·0.84·0.5。其中0.84是植物的经验性吸光系数，0.5是假设植物吸收的光能被两个光系统均分。

到处是叶绿素荧光的资料，非要我粘贴到这里。。。。

㈧ 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验，简述其过程与原理。

如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，从而对基因的表达起抑制或增强的作用，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性：（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，荧光素酶与底物反应，如pgl3-basic等。（3）
加入特定的荧光素酶底物转录因子是一种具有特殊结构，也称为反式作用因子。荧光素酶报告基因实验（luciferase
assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，这些特异性的序列被称为顺式作用元件、行使调控基因表达功能的蛋白质分子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合。（2）
将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系，转录因子的dna结合域和顺式作用元件实现共价结合。其原理简述如下，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比，产生荧光

㈨ 请问：做荧光定量PCR时，△△Ct值是什么意思，它的计算公式是什么

△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。

起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

(9)日光诱导荧光提取算法扩展阅读

荧光定量PCR的原理：

荧光定量PCR技术：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。

实时荧光定量常用的荧光化学分类有SYBR Green I法和Tag Man探针法。

Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。