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熒光包封率演算法

發布時間:2022-04-27 17:27:58

『壹』 熒光檢測方法

熒光檢測是一種自然發光反應,通過熒光素酶與 ATP進行反應,可檢測人體細胞、細菌、黴菌、食物殘渣,在15秒鍾內得到反應結果。光照度通過專用設備進行測量,並以數字形式予以表示,在1975年首先被應用到食品工業中,在1985年在化妝品製造業中得到應用。
熒光定量:採用國際主流的熒光定量PCR技術,迅速提升技術水平。
結果穩定:檢測結果CV值與進口全自動PCR儀接近,具有自檢功能,避免錯誤數據的輸出。
封閉操作:全部檢測過程均為閉管操作,於反應管處檢測熒光,有效防止污染,解決PCR技術中最棘手之難題。
准確定量:滿足臨床對量化的需求,定量盪圍寬,可涵蓋大部分病原微生物,自動曲線擬合。
靈敏度高:利用光譜信號靈敏性的優勢,有效提高檢測靈敏度。
安全:全程無毒檢測。
操作簡便:省去後處理的煩瑣過程。
直接列印:直接列印結果,無須記錄大量數據。
升級版:FS1000有與電腦連接的數傳輸口,可以連接電腦,根據用戶需要提供先進分析軟體,全面分析實驗數據。(電腦和列印機選配件)
故障率低:維護非常簡單。
節約資源:可利用現用PCR擴增儀,最大限度節約資源。

『貳』 免疫熒光染色中,細胞固定後,不進行封閉處理,是不是不好

這個沒有絕對的.取決於你的試驗方法和目的.一般來說,固定後,把樣本再轉移到保存液中,可以大大延長保存的時間. 為了保護抗原表位,建議你使用新鮮配置的多聚甲醛來固定.固定後立刻轉移到5%BSA的PBS溶液中(最好放防腐劑),可以在4度保存一段時間. 當然,樣本長時間保存,肯定對結果會有不好影響.至於影響的大小,你要做一個時間曲線來證明.以後就心中有數了. 還有一點要注意的是,抗體對抗原表位的識別.有些抗體只能識別未固定的表位,有些可以識別固定後的,有些只能識別變性的肽鏈.購買的時候也要特別注意.

『叄』 基質膠上怎樣做細胞免疫熒光試驗

免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。
操作步驟:
1.細胞鋪板:將細胞以合適的密度(注意:一般情況下,細胞密度不要太高,不要疊在一起,否則干擾最後拍片)接種於玻底培養皿(b小編用的是confocal皿:如下圖)中,進行轉染,加葯誘導等實驗處理。

2.固定:吸去培養基,PBS清洗2次。3min/次。加4%的多聚甲醛(用1X的PBS稀釋配製),室溫固定20-30min。PBS清洗3次,3-5min/次。吸干PBS。
3.通透:加0.3%-0.5%Triton X-100(用1X的PBS稀釋配製),室溫通透20-30min(如果是檢測細胞膜上表達的抗原,則省略此步驟)。PBS清洗3次,3-5min/次。吸干PBS。
4.封閉:在玻底培養皿中滴加正常血清或5%BSA封閉液,室溫封閉30-60min;
5.孵育一抗:吸掉封閉液,不用PBS洗,在每個玻底培養皿中滴加足夠量的稀釋好的一抗,並放入濕盒,4℃孵育過夜;
注意:一般抗體稀釋比約為1:50-1:100。正常玻底皿培養皿每皿加50-100ml抗體稀釋液(至少要能恰好浸沒住底部細胞)。還有必須保證濕盒有水,以免乾片。一抗建議回收,放-20℃或-80℃保存。若是檢測多個指標,所用一抗必須是不同來源。
6.孵育二抗:回收一抗,加0.1%的PBST 清洗3次,3-5min/次。吸干PBST。滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。
注意:該步驟及之後步驟都需要避光操作。二抗稀釋倍數約為1:100-1:200。
7.復染核:滴加DAPI或Hochest孵育5-10min(避光操作),對樣品進行染核,PBST 浸洗4次,每次5min。
8.拍片:在共聚焦顯微鏡或熒光顯微鏡下觀察採集圖像。

『肆』 X射線熒光吸收光譜圖中,吸收限的產生原理

X射線熒光及其分析原理
1、X射線
X射線是一種電磁波,根據波粒二相性原理,X射線也是一種粒子,其每個粒子根據下列公式可以找到其能量和波長的一一對應關系。
E=hv=h c/l
式中h為普朗克常數,v為頻率,c為光速,l為波長。
可見其能量在0.1 ~100(kev)之間。
g X 紫 可 紅 微 短 長
射 射 外 見
線 線 線 光 外 波 波 波
波長
X射線的產生有幾種
高速電子轟擊物質,產生韌致輻射和標識輻射。其產生的韌致輻射的X射線的能量取決於電子的能量,是一個連續的分布。而標識輻射是一種能量只與其靶材有關的X射線。
常見的X射線光管就是採用的這種原理。其X射線能量分布如下:
強度
能量
2、同位素X射線源。
同位素在衰變過程中,其原子核釋放的能量,被原子的內層電子吸收,吸收後跳出內層軌道,形成內層軌道空位。但由於內層軌道的能級很低,外層電子前來補充,由於外層電子的能量較高,跳到內層後,會釋放出光能來,這種能就是X射線。這就是我們常見的同位素X射線源。由於電子的能級是量化的,故釋放的射線的能量也是量化的,而不是連續的。
強度
能量
3、同步輻射源。
電子在同步加速器中運動,作園周運動,有一個恆定的加速度,電子在加速運動時,會釋放出X射線,所以用這種方法得到的X射線叫同步輻射X射線。
2、X射線熒光
實際上,有很多辦法能產生X射線,例如用質子、a射線、l射線等打在物質上,都可以產生X射線,而人們通常把X射線照射在物質上而產生的次級X射線叫X射線熒光(X-Ray Fluorescence),而把用來照射的X射線叫原級X射線。所以X射線熒光仍是X射線。
3、特徵X射線
有人會問,為什麼可以用X射線來分析物質的成分呢?這些都歸功於特徵X射線。
早在用電子轟擊陽極靶而產生X射線時,人們就發現,有幾個強度很高的X射線,其能量並沒有隨加速電子用的高壓變化,而且不同元素的靶材,其特殊的X射線的能量也不一樣,人們把它稱為特徵X射線,它是每種元素所特有的。莫塞萊(Moseley)發現了X射線能量與原子序數的關系。
E?(z-s)?
E是特徵X射線能量,Z是原子序數,s是修正因子。
這就是著名的莫塞萊定律, 它開辟了X射線分析在元素分析中的應用。
為什麼會有特徵X射線的出現呢?這可以從玻爾的原子結構理論找到答案。原子中的電子都在一個個電子軌道上運行,而每個軌道的能量都是一定的,叫能級。內層軌道能級較低,外層軌道能級較高,當內層的電子受到激發(激發源可以是電子、質子、a 粒子、l射線、X射線等),有足夠的能量跳出內層軌道,那麼,較外層的電子躍遷到內層的軌道進行補充,由於是從高能級上跳往低能級上,所以會釋放出能量,其能量以光的形式放出,這就是特徵X射線。
Kb
Ka
原子核
K L M
層 層 層 La
M層
La 較高能級
L層
Ka Kb
K層 低能級
特徵X射線依躍遷的不同而分別稱為Ka、Kb、La、Lb……
4、X射線對物質的作用
物質特徵X射線
散射
X射線 結果 光電子
物質 其它作用
光電子效應是我們探測X射線的基礎。散射則會導致本底的出現,而特徵X射線則是我們作為元素分析的基礎。
5、X射線熒光分析
X射線用於元素分析,是一種新的分析技術,但在經過二十多年的探索以後,現在已完全成熟,已成為一種廣泛應用於冶金、地質、有色、建材、商檢、環保、衛生等各個領域的新的分析技術。
每個元素的特徵X射線的強度除與激發源的能量和強度有關外,還與這種元素在樣品中的含量有關,用下式表示
Ii =f(C1,C2…Ci…)
i=1,2…
Ii是樣品中第i個元素的特徵X射線的強度,C1,C2,……是樣品中各個元素的含量.。
反過來,根據各元素的特徵X射線的強度,也可以獲得各元素的含量信息。這就是X射線熒光分析的基本原理。
有人會問,又為什麼要用X 熒光分析呢?為什麼不用原級的X射線呢,因為X光管的陽極物質也會發出特徵X射線呀?
不錯,早年曾使用過這種方法。但這種方法的弊病也是顯而易見的。因為X光管中是要抽真空的,放樣品不方便。其次,由於有很強的連續譜作為背景,所以測量的靈敏度很有限。如果採用熒光方法,由於特徵X射線的發射是各向同性的,而散射則是有方向性的,所以可以選擇探測角度,盡量避開散射本底,從而大大提高了測量靈敏度,其次,放樣品也變得很簡單了。所以,目前都採用了X熒光方法。
6、X射線熒光分析法與其它分析方法的比較
對樣品進行成份分析有很多方法,例如,中子活化、原子發射光譜、原子吸收光譜、質譜、極譜以及傳統的化學分析方法。那麼,X射線熒光分析法有哪 些特點呢?
優點:
(a)分析速度高。測定用時與測定精密度有關,但一般都很短,2~5分鍾就可以測完樣品中的全部待測元素。
(b)X射線熒光光譜跟樣品的化學結合狀態無關,而且跟固體、粉末、液體及晶質、非晶質等物質的狀態也基本上沒有關系。(氣體密封在容器內也可分析)但是在高解析度的精密測定中卻可看到有波長變化等現象。特別是在超軟X射線范圍內,這種效應更為顯著。波長變化用於化學位的測定。
(c)非破壞分析。在測定中不會引起化學狀態的改變,也不會出現試樣飛散現象。同一試樣可反復多次測量,結果重現性好。
(d) X射線熒光分析是一種物理分析方法,所以對在化學性質上屬同一族的元素也能進行分析。可分析的元素范圍從Na到U。WTH2000型的元素分析范圍是Na到U,含量范圍為10PPm~100%。因此該法已用於銅合金、鎳合金中高含量Cu、Ni的分析.
(e)分析精密度高。WTH-2000型的分析精度達0.1%,檢出限可達10ppm。
(f)制樣簡單,固體、粉末、液體樣品等都可以進行分析。
缺點:
(a)難以做絕對分析,因此定量分析需要標樣。
(b)對輕元素的靈敏度要低一些。

『伍』 抗熒光衰減封片劑(含DAPI)和不含DAPI的區別

抗熒光衰減封片劑是一種用於減緩熒光衰減的封片試劑。以甘油為基礎,加入抗熒光衰減劑,有強烈的抗熒光衰減作用,用於對熒光組織和細胞樣品的封片。封片後,樣品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。在封片時用移液槍滴一滴抗熒光衰減封片液,蓋上蓋玻片就可以了。封片劑含細胞核DNA熒光染料DAPI,使實驗操作更簡便;封片劑乾燥後會形成一層牢固的塗層,光學透明,非常便於後續觀察、拍照與儲存。索萊寶DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料,常用於熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜,它可以用於活細胞和固定細胞的染色,顯微鏡下可以看到顯藍色熒光的細胞。DAPI和雙鏈DNA結合後,最大激發波長為360nm,最大發射波長為460nm。

『陸』 種元素量的現場駐地分析 波長色散X射線熒光光譜法

1 范圍

本方法規定了土壤、水系沉積物和岩石試樣中20種元素現場駐地的測定方法。

本方法適用於土壤、水系沉積物和岩石中的銀、砷、金、鋇、鈣、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉛、銣、鍶、鈦、釩、鎢、釔、鋅和鋯量的現場駐地測定。本法檢出限與測定范圍見表1。

表1 測定范圍[wB,μg/g]

方法檢出限按下式計算:

區域地球化學勘查樣品分析方法

式中:LD——檢出限;m——1μg/g元素含量的計數率,1/[s·(μg·g-1)];IB——背景的計數率,1/s;T——峰值和背景的總計數時間,s。

2 規范性文件

下列文件中的條款通過本方法的本部分的引用而成為本部分的條款

下列不注日期的引用文件,其最新版本適用於本方法。

GB/T 20001.4 標准編寫規則 第4部分:化學分析方法。

GB/T 14505 岩石和礦石化學分析方法總則及一般規定。

GB/T 14506.1 硅酸鹽岩石分析方法。

3 方法提要

試料採用粉末直接壓片制樣。用攜帶型波長色散X射線熒光光譜儀進行測定。各分析元素分別採用鉬靶MoKα線的康普頓二次散射線作內標和經驗系數法校正元素間的吸收-增強效應。

4 試劑

低壓聚乙烯粉(北京助劑工廠)

5 儀器及器具

5.1 攜帶型波長色散X射線熒光光譜儀

俄羅斯SPECTROSCAN-U型攜帶型波長色散X射線熒光光譜儀:端窗鉬靶X射線管(功率4W,高壓 40kV,電流100μA)。

5.2 碎樣機

BUS-2型攜帶型高速碎樣機(貝利珠牌,地礦部龍江職工技協碎樣機廠)。

5.3 壓樣機

FY-10型粉末壓片機,油缸壓力9.807×104Pa(天津市科器高新技術公司製造)。

5.4 模具

制樣模具外徑40mm,內徑31mm。

5.5 篩

標准檢驗篩,孔徑0.074mm及0.097mm(浙江上虞正陽紗篩廠製造)。

5.6 JPT型葯物架盤天平

6 分析步驟

6.1 試料

試料粒徑應小於0.074mm,在室溫乾燥後,裝入小塑料瓶中備用。

試料量 稱取4.0g試料,精確至0.1g。

6.2 校準試樣

隨同試料分析同類型的標准物質用於未知試樣的校準。

6.3 測定

6.3.1 試樣片的制備 用JPT-型葯物架盤天平(5.6)稱取試料(6.1),倒入模具內,用低壓聚乙烯粉鑲邊墊底,在9.807×104Pa的壓力下,壓製成內徑為31mm,外徑為40mm的樣片;取出樣片,用彩筆在樣片的白色低壓聚乙烯邊上寫上樣品編號或名稱。測量時,只能拿樣片的邊緣,以避免X射線測量面的污染。

6.3.2 標准化樣片的制備

6.3.2.1 為了校正儀器的漂移,先要制備標准化樣品。標准化樣品應包括分析元素和干擾元素,且各元素應有一定的含量,以減少計數的統計誤差。標准化樣品的物理及化學性質要穩定。所用的化學試劑為(化學純或高於化學純試劑):

CuO、PbO、ZnO、As2O3、Ni203、RbCl、SrCO3、BaCO3、V2O5、Cr2O3、MnO2、Fe2O3、Cr2O3、CaCO3、AuCl、AgNO3和WO3。將這些試劑在105℃乾燥2h,置乾燥器中備用。

TiO2、ZrO2、Y2O3、Al2O3(基體)、SiO2(基體),在1000℃灼燒2h,置乾燥器中備用。

6.3.2.2 標准化樣片的配製(20.0000g)。在萬分之一電子天平上稱取CuO 0.0500g,PbO 0.0646g,ZnO 0.0498g,As2O30.0132g,Ni2O3 0.0282g,ZrO2 0.0270g,RbCl 0.0283g,SrCO3 0.0337g,BaCO3 0.0575g,V2O5 0.0357g,Cr2O3 0.0585g,MnO2 0.0633g,Fe2O3 1.4297g,Cr2O3 0.0028g,CaCO3 4.9946g,AuCl 0.0472g,AgNO3 0.0630g,WO3 0.0504g,Y2O3 0.0254g,TiO2 0.1668g,Al2O3 2.9133g和SiO2 9.7970g放於瑪瑙缽中混勻,並按6.3.1條步驟制備成標准化樣片。標准化樣片中各元素含量見表2。

表2 標准化樣品中各元素含量[wB,μg/g]

6.3.3 X射線熒光光譜法測量

6.3.3.1 測量條件。

表3 分析元素測量條件

X射線管電壓為40kV,電流100μA,試樣盒面罩直徑30mm,空氣光路,LiF200彎晶,封閉正比計數器。各分析元素的測量條件見表3。

6.3.3.2 背景校正。採用兩點法扣背景。計算公式為(1):

區域地球化學勘查樣品分析方法

其中:IN——扣除背景以後的凈強度;Ip——在譜線波長處測得的譜線加背景的總強度;IB1和IB2——分別為在譜線波長前後背景波長處測得的背景強度。

6.3.3.3 儀器漂移校正。通過測量標准化樣片,校正儀器的漂移。

6.3.4 校準曲線的繪制

6.3.4.1 標准樣品的制備。選用土壤GBW07404~07408、水系沉積物GBW07301~07312、硅酸鹽岩石GBW07103~07114、合成硅酸鹽標樣GBW07705~07711、礦石金GBW070014~070015和GBW07297~07300一級標准物質按6.3.1步驟制備成標准樣片後,按6.3.3.1測量條件測量各元素的X射線熒光光譜強度繪制校準曲線。標准樣片的測量要在一次開機時間內完成;在測量之前,儀器要預熱30min,以保證儀器穩定運行。校準曲線范圍見表4。

表4 校準曲線范圍[wB,μg/g]

6.3.4.2 校準與校正。標准、基體效應校準和譜線重疊干擾校正,使用綜合數學校正模式進行回歸。

計算公式為:

區域地球化學勘查樣品分析方法

式中:Ci——標准物質分析元素i的標准值(或未知樣品中分析元素i基體校正後的含量);Ai——校準曲線常數,譜線重疊干擾校正系數或共存元素對分析元素的影響系數;Bi——校準曲線二次系數或交叉影響系數;A0和Fi——常數項;Ni——分析元素i的X射線強度;N——分析元素i,干擾元素k或共存元素j的X射線強度;Nnc——鉬靶kα線的二次康普頓散射線的強度。

6.3.5 測量

6.3.5.1 輸入分析元素的測量條件和標准物質中各元素的含量(標准值)。

6.3.5.2 測量標准樣品。輸入標准樣品名稱,測量標准物質中各分析元素的X射線熒光光譜強度。

6.3.5.3 測量標准化樣品。為了克服儀器的漂移給分析帶來的誤差,要進行儀器漂移校正。採用強度校正法校正儀器漂移。在製作標准曲線時,同時測定標准化樣片和分析標准樣品,這時標准化樣片中某元素分析線的強度為Is。用分析標准樣品的強度製作校準曲線。當測定未知試樣時,要先測量標准化樣片,這時標准化樣片中該元素分析線的強度為Im,則強度校正系數為α=Is/Im。未知試樣中該元素的分析線強度乘上此校正系數α,得到標准化後的強度,用此強度計算未知試樣的含量。

在正常情況下,每隔6h~8h測量一次標准化樣片。若儀器環境條件較差或預熱不充分,則要縮短測量標准化樣片的時間間隔。

設置標准化樣片名稱,測量標准化樣片中各分析元素的X射線強度。標准化樣片中各分析元素的參考強度必須與標准物質在同一次開機中測量,以保證儀器漂移校正的有效性。

6.3.5.4 回歸分析運算。用綜合數學校正模式,對標准物質中各元素的X射線強度與其含量的關系進行回歸計算,求出常數,A0,Bi和Fi,並保存在計算機定量分析軟體中。

6.3.5.5 測量未知樣品。

1)啟動定量分析程序,測量標准化樣片,進行儀器漂移校正。

2)檢查樣品即為標准樣品或管理樣品,用於檢查儀器的穩定性和性能的變化。測量含量已知的檢查樣品。其結果應滿足規范上制定的誤差要求。

3)輸入未知樣品名稱,測量未知樣品。

7 分析結果的計算

根據未知樣品的X射線強度,由計算機軟體按公式(2)計算含量並列印出分析結果。

8 精密度

選用幾個標准物質,各制備10個樣片,按照各元素選定的測量條件進行測量。方法的精密度見表5。

表5 方法的精密度[n=10]

附加說明

本方法由中國地質調查局提出。

本方法由武漢綜合岩礦測試中心技術歸口。

本方法由中國地質科學院地球物理地球化學勘查研究所負責起草。

本方法主要起草人:李國會。

『柒』 求助 細胞免疫熒光的詳細操作步驟

細胞免疫熒光的詳細操作步驟
1,取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里,PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心。
2,4%多聚甲醛固定20分鍾,PBS洗三遍。
3,0.2%Triton X 100通透10分鍾,PBS洗三遍。
4, 與二抗相同宿主的血清封閉30分鍾,PBS洗三遍。
5.,一抗4度濕盒內過夜,也可37度2小時,感覺前者效果好,PBS洗三遍。
6,二抗室溫2小時,或者37度1半小時,PBS洗三遍。
7,最好用DAPI染核,然後直接照熒光片。
8,蒸餾水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周。

『捌』 一種熒光棒,折一折會亮,一段時間後會滅掉,如何讓它恢復能量

無法。
那種是用兩種液體混合發亮的。折 的是裡面有很薄的玻璃管。你切開看看咯。。扯斷後發亮。

關於這種熒光棒的介紹:

熒光棒熒光棒 熒光棒發光原理
熒光棒中的化學物質主要由三種物質組成:過氧化物、酯類化合物和熒光染料。簡單地說,熒光棒發光的原理就是過氧化物和酯類化合物發生反應,將反應後的能量傳遞給熒光染料,再由染料發出熒光。目前市場上常見的熒光棒中通常放置了一個玻璃管夾層,夾層內外隔離了過氧化物和酯類化合物,經過揉搓,兩種化合物反應使得熒光染料發光。
發光特性
熒光棒的棒剛折亮時的亮度越高,發光時間就越短:
根據熒光棒的這個特性,我們把已經發光的熒光棒放在低溫環境中(如:冰箱、冷櫃),就可以抑制熒光棒中兩種液體的化學反應,取出後可繼續使用。
安全性
近幾年來,兒童和年輕人把熒光棒當成一種時髦的玩藝兒,也曾有媒體說:「熒光棒所含成分為苯二甲酸二甲酯和苯二甲酸二丁酯,具有低毒性。如果不慎發生泄漏,被人體誤吸或觸碰,會造成惡心、頭暈、麻痹甚至昏迷等傷害人體健康的現象。」對此,記者采訪了專門研究熒光棒的化學專家、清華大學化學系物理化學研究所的趙福群,他表示,只要使用方法正確,熒光棒不會對人體造成太大傷害。
趙福群認為,由於熒光棒中的液體化學物質被聚乙烯(塑料)包裝,所以不會對人體造成太大傷害。因為熒光棒所發出的光是靠化學反應激發染料發出的非放射性光,而不是由放射線激發染料發出的光,不會傷害人體。但趙福群也對時下有些人為追趕時髦,將熒光棒弄破,把裡面的液體塗抹在身上的做法表示反對,因為熒光棒中的化學物質直接接觸皮膚會對人體造成一定的損害。尤其注意不要讓兒童誤食。
之所以有觀點認為熒光物質會傷害人體,是因為在有些夜光手錶、礦井應急信號燈等中用的都是放射性物質,使染料在黑暗處發光,所以人們誤認為熒光棒中也是運用了放射性物質,形成認識上的誤差。消費者鑒別某夜光產品是否為放射性發光的辦法是,放射性發光持續的時間比較長,並且光強度弱些;而非放射光持續的時間比較短。
注意事項
熒光棒中的液體不可食用,且具有一定的黏附性。如果泄漏:容易污染傢具、地板、衣物、皮膚等,若出現以上情況須及時清洗;如果熒光棒中的液體進入眼睛中,須及時用清水洗凈或就醫。
因此,嚴禁用刀或剪刀弄破熒光棒的塑料管;嚴禁扭曲熒光棒,以防熒光棒中的液體泄漏。
運輸和保存
熒光棒在運輸和保存過程中,應避免高溫暴曬和重力撞擊或摔落。以免影響熒光棒的發光時間和亮度,以及避免弄破熒光棒中的玻璃管導致熒光棒提前發光以致使熒光棒失效。

http://ke..com/view/987112.html?wtp=tt

『玖』 免疫熒光染色時封閉的一步是干什麼的

是封閉可以非特異性結合蛋白質的位點,也就是減少抗體(一抗和2抗都是蛋白質)的非特異性結合。

『拾』 免疫熒光染色能進行細胞平均熒光強度分析嗎

(1)你的二抗是用fitc標記的,為避免熒光分解,分裝及熒光顯微鏡觀察時均要避光;
(2)封片最好用甘油加0.5mmol/l
ph9.0-9.5的碳酸氫鹽緩沖液,後者能使玻片透明;
(3)關於免疫酶染色,如果是用過氧化物酶做標記,就必須用3%h2o2以去除內源性過氧化物酶;2n鹽酸需要使用,目的是使dna變性,讓br抗體能夠充分地與已經摻入的br結合。
做間接法免疫熒光染色,如何設置對照?
參考見解:最好是同一視野在未用熒光激發下進行對照,看是否非特異性染色。
(1)空白對照:如果你做的是石蠟切片免疫組化,這個對照必須有,目的是看自發熒光,脫蠟後直接在熒光顯微鏡下觀察。
(2)陰性對照:標本直接滴加二抗,呈陰性反應。
(3)抗原對照:標本加同種動物的未免疫血清,以pbs沖洗後,在加抗免疫球蛋白熒光抗體。因未免疫動物的血清中無特異性抗體,應呈陰性反應。

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