组织培养配方的算法

① 组织培养各种培养基的配方

我上学时用过的MS培养基：MS培养基
MS培养基配方 mg/L
大量元素：NH4NO3 1 650
KNO3 1 900
CaCl2·2H2O 440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4 700
微量元素：KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
FeSO4·7H2O（27.8）+Na2-EDTA·2H2O（37.3）
有机成分：肌醇 100
烟酸 0.5
盐酸吡哆醇（维生素B6） 0.5
盐酸硫胺素（维生素B1） 0.5
甘氨酸 2
注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍，而除去肌醇后的有机，还是可以配成1000倍的。
注意事项：
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。

② 请介绍下胡萝卜组织培养的培养基配方

植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。
MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg／L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

下面列出继代培养和试管苗培养的培养基配方。①继代培养和生芽培养的培养基配方是：MS培养基+6BA(质量浓度为0.5～1.0 mg/L)+NAA(质量浓度为0.1～0.15 mg/L)。即在1 L MS培养基中加入5～10 mL6BA和1～1.5 mL的NAA母液。NAA配合6BA，可以促进不定芽的生长。②生根培养的培养基配方是：MS培养基+NAA(质量浓度为0.1～0.5 mg/L)。即在1 L MS培养基中加入1～5 mL的NAA母液。NAA起促进生根的作用。

以上参阅http://..com/question/27961620.html?an=2&si=1

③ 如何进行组织培养

专家解答

组织培养繁殖法是利用细胞的全能性和组织的再生能力，切取草莓植株的部分组织或器官，在无菌条件下，接种到人工配置的培养基上，使之发育成完整的植株。草莓组织培养繁殖的优点是：

（1）植株健壮结果好任何植物在长期的无性繁殖过程中都容易感染病毒，受到病毒感染的植株生活力衰退，产量降低，品质变劣。而组织培养繁殖的整个过程是在无菌环境中进行的，对于做繁殖材料的茎尖也要进行脱毒处理，这样所得的秧苗不含或少含病毒，比一般秧苗叶片大而厚，叶色浓绿；生长健壮且整齐一致；结果期延长3周，平均增产20%左右；果个大，品质优。

（2）繁殖速度快利用组织培养法繁殖草莓，一年内一个分生组织可获得几千株甚至几万株秧苗，这种繁殖方法对加速新品种推广，特别是对抽生匍匐茎低的品种的繁殖更为有利。

（3）繁殖不受季节限制组织培养是在操作室和配套温室中进行的，不受外界环境条件的影响，一年四季均可生产，在人工控制条件下，可进行工厂化育苗。

（4）节省土地，利于种质保存用组织培养法繁殖是在实验室中进行的，对露地占用少。所以，不仅节省土地，便于管理，而且对保存种质资源更加安全。

组织培养繁殖有以下几个步骤：

（1）配制培养基常用的培养基是MS培养基、怀特培养基，其配方见表11。

①配制母液。将营养成分中大量元素扩大10倍，微量元素扩大100倍。把大量元素、微量元素、有机生长物质分别贴上标签，放在3～5℃环境中待用。植物生长调节剂如6-苄基嘌呤、激动素用少量0.5摩尔/升的盐酸溶解，萘乙酸用酒精溶解，溶解后加水稀释。

②培养基配制。将所要用的琼脂加热溶解，加入蔗糖搅拌，配制成琼脂-蔗糖液。然后按量把配制好的母液置入准备好的容器中，接着把琼脂-蔗糖液也置入同一容器中，充分搅拌，定容到规定的体积。

③调整酸碱度。琼脂培养基加热灭菌时，pH会降低0.1～0.3，所以在加热前用0.1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠液调整培养基的pH。

④高温消毒。把培养基趁热注入试管或三角瓶内，注入量为容器容积的1/3左右，塞上棉塞，缚紧，放入高压蒸汽锅内灭菌。蒸汽锅压力维持在78.5～98千帕，时间为10～20分钟。

单位：毫克/升序号化合物MSWhite1硝酸钾（KNO3）1900802硝酸铵（NH4NO3）1650-3四水硝酸钙[Ca（NO3）2·4H2O]-3004硫酸钠（Na2SO4）-2005七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）3707206七水磷酸二氢钠（NaH2PO4·7H2O）-16.57磷酸二氢钾（KH2PO4）170-8氯化钾（KCl）-659一水氯化钾（KCl·H2O）440-10四水硫酸锰（MnSO4·4H2O）22.37.011七水硫酸锌（ZnSO4·7H2O）8.63.0表11营养基配方序号化合物MSWhite12硫酸铁[Fe2（SO4）3]-2.513五水硫酸铜（CuSO4·5H2O）0.0250.00114氧化钼（MoO3）-0.00115硼酸（H3PO3）6.21.516碘化钾（KI）0.830.7517六水氯化亚钴（CoCl2·6H2O）0.025-18二水钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）0.25-19肌醇10010020烟酸0.50.321盐酸硫胺素0.40.122盐酸吡哆醇0.50.123甘氨酸2.0324蔗糖300002000025琼脂100001000026pH5.85.6表11营养基配方（续）-1（2）选材与消毒选取健壮植株上充实、小叶尚未展开的匍匐茎先端3厘米左右的幼嫩组织作培养材料。将材料用洁净流动的清水冲洗0.5～1个小时，然后用70%的酒精浸泡1分钟，再用0.1%升汞水浸泡7分钟，最后用无菌水冲洗2～3次。

（3）接种在无菌的超净工作台上，用镊子去掉茎尖组织的叶片，在解剖镜下，用消过毒的刀片切取茎尖分生组织0.3～0.5毫米大小，放入备用的培养基上。

（4）初代培养将接过种的试管或三角瓶放置在温度25～28℃，光照强度2000勒克斯，每天照射10小时的无菌条件下进行培养。10～15天接种物开始萌发，再经7～10天接种物产生很多小芽，形成芽丛；3个月后，无根苗长至3～4厘米。这时初代培养结束。

（5）继代培养当初代培养的无根苗长到3～4厘米时，将其取出进行生根培养。把剩下没达到3～4厘米的芽，按3～4个芽为一个芽丛重新分开，再重新植入同种培养基（初代培养基）上进行增殖培养，这种增殖培养称继代培养。1个月左右新的一批无根苗又繁殖出来，再用同种方法进行下一次继代培养。

（6）生根培养将初代培养或继代培养的高度已达到3～4厘米的无根苗，扦插到珍珠岩内进行生根培养。生根培养的苗床温度保持在18～20℃，空气湿度在80%以上，珍珠岩中要喷洒营养液和生根素。20天以后，当秧苗长出3～4条，长度达1.5～2.5厘米的根系时，可进行移栽锻炼。目前国内比较常用的营养液配方见表12。

化合物名称园试配方化合物用量毫克/升毫摩/升元素含量（毫克/升）大量元素总计（毫克/升）Ca（NO3）.7P41MgSO4.7H2O4932Mg48S64Na2Fe-EDTA20-Fe2.8H3BO32.86-B0.5MnSO4·4H2O2.13-Mn0.05ZnSO4·7H2O0.22-Zn0.05CuSO4·5H2O0.08-Cu0.02（NH4）6Mo7O24·4H2O0.02-Mo0.01N243P41K312Ca160Mg48S64表12营养液配方注：参引2001年张福墁主编《设施园艺学》。

（7）移栽当秧苗已长出3～4条1.5～2.5厘米长新根时，可移栽到室外进行土壤育苗。移栽后的前两周应覆盖薄膜与覆盖遮阳网，保持土壤和空气湿度，缓苗后撤除覆盖物。

提示板

组织培养能培育优质的壮苗，但技术要求比较严谨，目前还只在科研院所进行。随着科技的进步，大型繁育场将逐步得到推广。无毒育苗将是草莓苗木繁育的主要手段。

④ 月季的组织培养法是怎样的

用组织培养的方式进行繁殖，其繁殖率远远高于其他无性繁殖的手段，所得的新苗不仅可以保留原品种的优良性状，而且能得到无病毒感染的植株。所用的时间比播种苗、扦插或嫁接苗均短，在良好的条件下，经过2个月的组织培养苗，春季下地栽种当年即可见花。

月季的组织培养繁殖在国内外已有不少报道，目前这一快速繁殖方法已基本完善，在一些地方已经用于工业化生产，对加速老品种更新换代，迅速普及名优品种起到了很大作用。在培养程序上基本相同如图4，但在不同条件下，可以有一定程度的灵活性。

图4 月季组织培养流程图

MS培养基的配制：先在洁净的不锈钢锅里放入约750毫升蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好先在水浴锅里将琼脂溶化，如果直接加热，应不停地搅拌，防止锅底烧焦或沸腾溢出。然后加入表5中的母液Ⅰ50毫升，母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各5毫升，加蒸馏水将体积调到1升。充分混合好后，用氢氧化钾或氢氧化钠将溶液pH调到5.8左右。至此培养基的配置已算完成。

分装消毒：将培养基分别注入试管或三角瓶内，深度为全深的1/3或1/4即可。然后加盖或用棉塞塞紧。将试管或三角瓶平摆在高压锅内，在压力202.65千帕（2个大气压），温度120℃下灭菌15～20分钟即可。灭菌后取出放至室温即可使用。做好的培养基一般应在2周内用完，短时间可存放于室温条件，如不能尽快用完，应存放于4℃条件下，如果培养基表面变干，就不能再用。

2.无菌培养的建立

（1）植物组织材料选取与消毒

首先从生长在田间的或盆栽的优良品种植株上，选取生长健壮的当年枝条，采回后切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷蘸浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲净，毛巾擦干，置小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少有一个侧芽。然后在超净工作台或接种箱内，用饱和漂白粉上清液，作表面灭菌15～30分钟。然后倾去灭菌溶液，用无菌水刷洗数次（无菌水是用1000毫升的大三角瓶，盛放2/3体积的自来水，经半小时的高压灭菌后放凉即可。无菌水存放时间不宜过长，以1～2周较好，时间长了要重新高压灭菌）。

（2）接种与培养

接种就是把植物材料插入培养基的过程，要注意严格执行无菌操作。将洗涤好的月季茎段用无菌纱布吸干外表水分，用灼烧过的镊子夹一块茎段送入装有培养基的管内，轻轻插在培养基上，再塞上高压灭菌过的棉塞。将接种好的试管放在培养室内培养，温度以21℃左右较好，光照10～12小时，光强800～1200勒克斯，从芽萌发到长到1厘米左右约需2～3周。

（3）继代增殖培养

将上面已经长大的月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上。增殖培养基可直接用MS培养基，也可在MS培养基中加入细胞分裂素BA和吲哚乙酸IAA。用量是每升培养基加1～2毫克BA，加0.1毫克IAA。月季小苗经5～6周1次的继代增殖，会按几何级数增殖起来。

（4）壮苗培养

继代增殖的小苗嫩茎很细弱，要进行一次壮苗培养，以取得适合生根和以后移栽的苗子。壮苗培养基是在MS培养基中加入细胞分裂素BA0.3～0.5毫克/升，加入吲哚乙酸IAA0.01～0.1毫克/升。将月季嫩茎投入壮苗培养基后，控制光照10～12小时/天，光强800～2000勒克斯，温度21℃左右。

（5）生根与移栽

经过壮苗培养的月季嫩茎长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。生根培养基是将MS培养基稀释1倍，再加入吲哚乙酸IAA1.0毫克/升或吲哚丁酸IBA0.5毫克/升，再加入活性炭300毫克/升和白糖30克/升。切下的月季嫩茎长度以2～3厘米为宜。经3周培养，就有数条白根生成，这时就可出瓶移栽。第一次移栽是把幼苗取出，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到蛭石或锯木屑＋园土（1∶1）的介质中，其他类似介质也可视情况选用，但要疏松通气，有一定的保水、保肥能力。种植密度每株2～3厘米×4～6厘米。移栽完毕浇透水，用0.1%百菌清、多菌灵或托布津等喷雾保苗。保持相对湿度85%以上。移栽1周后，可施稀薄的追肥。视苗大小，浓度逐渐由0.1%提高到0.3%左右，施肥种类可用复合肥、尿素、磷酸二氢钾以及饼肥水等等。通常7～10天喷一次杀菌剂保苗。在4～6周后，进行第二次移栽，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯或营养钵中，每杯种1苗，加强水、肥和病虫害管理防治，经4～6周，地上地下部分都充分生长，有些植株可能开花，此时可上盆或定植。

⑤ 急！植物组织培养的母液计算。

对于2000ml的培养基应该是这样配制的：
所谓1/2MS，指的是大量元素母液，正常的我们应该加入2000除以20即100ml的体积，因为是1/2MS，所以只需要加入50ml；微量元素母液加入：2000/100=20ml；铁盐母液2000/100=20ml;有机物母液2000/100=20ml；6BA加入4ml，就是4mg，NAA是0.2ml.蔗糖就是2000乘以3.0 %就是60g,琼脂为2000乘以0.8 %就是16g

⑥ 培养基母液配制的方法如何

配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说，各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物质，有时还要在培养基里添加有机附加物，如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生产上，首先选用已有的培养基配方，它是前人研究的成果，又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有，可以免去您再研究的麻烦，当然在生产实践中，也可适当改进。如果您找不到合适的配方，可先试用MS培养基，MS是Murashige和Skoog的缩写，他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以MS培养基为例，介绍怎样配制。
（1）配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1000倍称量后制成一种浓溶液，这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签，放在0～4℃的冰箱中，可使用半年到1年，这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的，不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。
母液①：硫酸镁18.5克，硝酸铵82.5克，硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的50倍，配1升培养基时量取20毫升母液。
母液②：氯化钙22.0克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液③：磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液④：乙二胺四乙酸二钠3.73克，硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑤：硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘化钾83毫克，钼酸钠25毫克，氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克，盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
（2）配制培养基。配制每1000毫升培养基，称取6～10克琼脂作凝固剂，具体按配方要求称量，放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水，按照母液顺序和规定量，量取母液。当母液加完后，根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等，细胞分裂素类0.04～10毫克，细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤，加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定，定容到所需的体积。继续加温，直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节，多数培养基的pH在5.4～6.0之间，MS培养基的pH为5.7。
将配好的培养基趁热倒入培养容器中，培养基占容器体积的1/3～1/4。不要将培养基沾到容器壁上，否则容易被杂菌感染。然后及时加盖，进行高压灭菌，灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15～20分钟，温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源，当高压锅内压力降到常压后，开启放气阀，打开锅盖，取出灭菌好的培养基，放在接种室中培养3天，没被感染后才能用来组织培养。

⑦ 请介绍下胡萝卜组织培养的培养基配方

表1N6朱至清(1975)培养基配方
药品名
配方量(mg/L)
母液倍数
称取量(g/L)
(NH4)2SO4
大量元素
463
10×
4.63
KNO3
2
830
28.3
CaCl2•2H2O
166
1.66
MgSO4•7H2O
185
1.85
KH2PO4
400
4.0
Na2-
EDTA
铁盐
37.3
100×
3.73
FeSO4•7H2O
27.8
2.78
MnSO4•4H2O
微量元素
4.0
1000×
4.0
ZnSO4•7H2O
3.8
3.8
H3BO3
1.6
1.6
KI
0.8
0.8
盐酸硫胺素(VB1)
有机物质
1
1000×
1.0
烟酸
0.5
0.5
盐酸吡哆醇(VB6)
0.5
0.5
甘氨酸
2.0
2.0
各种母液配制好后，要贴好标签，注明母液的名称，配制1
L培养基需要的吸取量、母液配制的日期，然后放入冰箱中储存。一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年以上，有机物质的母液保存时间在半年以内，但若发现有沉淀或霉变,应立即需重新配制。

⑧ 植物组织培养一般方法

植物组织培养可以分为四个阶段：
（1）建立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈伤组织或器官。
（2）进行增殖，不断分化产生新的植株，或直接产生不定芽及胚状体，也可以根据需要反复进行继代培养，以达到大量繁殖的目的。
（3）将植株转移进行生根培养，可以转入生根培养基，也可以直接切取进行扦插生根。
（4）试管苗过渡，即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

⑨ 什么是组织培养法

用组织培养的方式进行繁殖，其繁殖率远远高于其他无性繁殖的手段，所得的新苗不仅可以保留原品种的优良性状，而且能得到无病毒感染的植株。所用的时间比播种苗、扦插或嫁接苗均短，在良好的条件下，经过2个月的组织培养苗，春季下地栽种当年即可见花。

月季的组织培养繁殖在国内外已有不少报道，目前这一快速繁殖方法已基本完善，在一些地方已经用于工业化生产，对加速老品种更新换代，迅速普及名优品种起到了很大作用。在培养程序上基本相同（图4），但在不同条件下，可以有一定程度的灵活性。

图4月季组织培养流程图

1.接种培养2、3.继代增殖培养4.壮苗培养

在开始组织培养时，首先要配制培养基。目前最常用的月季培养基是MS培养基，其配方列于表4。

表4MS培养基配方

MS培养基母液的配制：为了更方便地配制培养基，要先配制比所需浓度高10～100倍的母液表5，并用家用冰箱在0℃左右贮存备用。母液要按无机成分分别配制，以免发生化学反应或沉淀。MS培养基的配制：先在洁净的不锈钢锅里放入约750毫升蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好先在水浴锅里将琼脂溶化，如果直接加热，应不停地搅拌，防止锅底烧焦或沸腾溢出。然后加入表5中的母液Ⅰ50毫升，母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各5毫升，加蒸馏水将体积调到1升。充分混合好后，用氢氧化钾或氢氧化钠将溶液pH调到5.8左右。至此培养基的配置已算完成。

分装消毒：将培养基分别注入试管或三角瓶内，深度为全深的1/3或1/4即可。然后加盖或用棉塞塞紧。将试管或三角瓶平摆在高压锅内，在压力202.65千帕（2个大气压），温度120℃下灭菌15～20分钟即可。灭菌后取出放至室温即可使用。做好的培养基一般应在2周内用完，短时间可存放于室温条件，如不能尽快用完，应存放于4℃条件下，如果培养基表面变干，就不能再用。

表5MS培养基母液的配制

2.无菌培养的建立

（1）首先从生长在田间的或盆栽的优良品种植株上，选取生长健壮的当年枝条，采回后切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷蘸浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲净，毛巾擦干，置小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少有一个侧芽。然后在超净工作台或接种箱内，用饱和漂白粉上清液，作表面灭菌15～30分钟。然后倾去灭菌溶液，用无菌水刷洗数次（无菌水是用1000毫升的大三角瓶，盛放2/3体积的自来水，经半小时的高压灭菌后放凉即可。无菌水存放时间不宜过长，以1～2周较好，时间长了要重新高压灭菌）。

（2）接种就是把植物材料插入培养基的过程，要注意严格执行无菌操作。将洗涤好的月季茎段用无菌纱布吸干外表水分，用灼烧过的镊子夹一块茎段送入装有培养基的管内，轻轻插在培养基上，再塞上高压灭菌过的棉塞。将接种好的试管放在培养室内培养，温度以21℃左右较好，光照10～12小时，光强800～1200勒克斯，从芽萌发到长到1厘米左右约需2～3周。

（3）将上面已经长大的月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上。增殖培养基可直接用MS培养基，也可在MS培养基中加入细胞分裂素BA和吲哚乙酸IAA。用量是每升培养基加1～2毫克BA，加0.1毫克IAA。月季小苗经5～6周1次的继代增殖，会按几何级数增殖起来。

（4）继代增殖的小苗嫩茎很细弱，要进行一次壮苗培养，以取得适合生根和以后移栽的苗子。壮苗培养基是在MS培养基中加入细胞分裂素BA0.3～0.5毫克/升，加入吲哚乙酸IAA0.01～0.1毫克/升。将月季嫩茎投入壮苗培养基后，控制光照10～12小时/天，光强800～2000勒克斯，温度21℃左右。

（5）经过壮苗培养的月季嫩茎长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。生根培养基是将MS培养基稀释1倍，再加入吲哚乙酸IAA1.0毫克/升或吲哚丁酸IBA0.5毫克/升，再加入活性炭300毫克/升和白糖30克/升。切下的月季嫩茎长度以2～3厘米为宜。经3周培养，就有数条白根生成，这时就可出瓶移栽。第一次移栽是把幼苗取出，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到蛭石或锯木屑＋园土（1∶1）的介质中，其他类似介质也可视情况选用，但要疏松通气，有一定的保水、保肥能力。种植密度每株2～3厘米×4～6厘米。移栽完毕浇透水，用0.1%百菌清、多菌灵或托布津等喷雾保苗。保持相对湿度85%以上。移栽1周后，可施稀薄的追肥。视苗大小，浓度逐渐由0.1%提高到0.3%左右，施肥种类可用复合肥、尿素、磷酸二氢钾以及饼肥水等等。通常7～10天喷一次杀菌剂保苗。在4～6周后，进行第二次移栽，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯或营养钵中，每杯种1苗，加强水、肥和病虫害管理防治，经4～6周，地上地下部分都充分生长，有些植株可能开花，此时可上盆或定植。