日光誘導熒光提取演算法

㈠ 低熒光強度ret比值演算法

根據熒光的強度，將散點圖劃分為三個RET區，並計算各區中某細胞總數的比率。
低熒光比率：LFR = 1000 - HFR - MFR。
RET=此細胞/（成熟細胞+此細胞）。

㈡ 熒光補償演算法有哪些

熒光燈帶補償是指對熒光燈進行了電容補償。
因為電力系統的用電設備通常都是感性負載，在使用時會產生感性電流，這部分電流對外部電路不做功，主要是用於建立磁場進行電能和磁能之間的能量轉換。由這部分電流產生的功率叫無功功率，它會使電源的容量使用效率降低也就是功率因數降低。通過在系統中適當地增加電容的方式（並聯補償電容器）就可以得以改善。

㈢ 葉綠素熒光參數npq計算

葉綠素熒光參數是一組用於描述植物光合作用機理和光合生理狀況的變數或常數值，反映了植物「內在性 」的特點 ， 被視為是研究植物光合作用與環境關系的內在探針 。現常用於分析葉綠素熒光參數的技術稱葉綠素熒光動力學技術，其在測定葉片光合作用過程中光系統對光能的吸收、傳遞、耗散、分配等方面具有獨特的作用，該技術被稱為研究植物光合功能的快速、無損傷探針，已逐漸在環境脅迫對植物光合作用影響研究方面得到應用。葉綠素熒光技術通常有調制和非調制兩種。調制葉綠素熒光測定技術，是利用具有一定的調制頻率和強度的光源誘導，通過飽和脈沖分析方法，使葉綠素熒光發射快速地處於某些特定狀態，以進行相應熒光檢測的技術。即其激發熒光的測量光具有一定的調制（開/關）頻率，檢測器只記錄與測量光同頻的熒光，因此調制熒光儀允許測量所有生理狀態下的熒光；打開一個持續時間很短（一般小於1 s）的強光關閉所有的電子門（光合作用被暫時抑制），從而使葉綠素熒光達到最大。該技術方便野外觀測之用。可恢復的最大熒光產量，它的獲得是在熒光P峰和M峰後，當開放的PSⅡ最大熒光產量平穩時，關閉作用光得到F0』後，把飽和光的閃光間隔期延長到180s/次，得到一組逐漸增大(對數增長)的最大熒光產量，將該組最大熒光產量放在半對數坐標系中即成直線，該直線在Y軸的截距即為Fmr。以(Fm-Fmr)/Fmr可以反映不可逆的非光化學淬滅產率，即發生光抑制的可能程度。

㈣ 熒光分析系統基本操作

在石油勘探開發過程中，地質岩心的熒光發光現象是初步判斷油氣顯示層段的最簡便、最直觀實用的重要標准之一。岩心是可反復使用的寶貴實物資料，經過多次觀察和取樣分析後，其表面的油氣會逐漸逸出、揮發，或岩心本身逐漸被腐蝕、風化甚至破壞，無法再現取心時的熒光情形。因此，岩心剛出筒時的物性、含油性特徵原態永久性保存顯得尤為重要。目前大部分油田進行地質岩心的熒光圖像採集時，採用簡易的熒光照相技術，得到的熒光圖像所反映的岩心熒光特性的誤差較大。熒光錄井常用的常規熒光檢測儀也往往只能依靠肉眼觀察，根據個人經驗對岩心樣品的熒光效應進行描述、判斷和分析，分析結果帶有較大的主觀性。因此無論是岩心庫熒光照相或是常規的岩心熒光錄井，均存在主觀誤差較大、設備簡陋、紫外線傷害等缺點。

熒光檢測技術在近年內發展迅速，為彌補常規熒光檢測儀器的不足，國內外研製了各式各樣的定量熒光分析儀及應用熒光顯微技術，從微觀角度對含油熒光進行定量分析。四川大學研製的宏觀岩心熒光圖像信息系統則是從宏觀角度整體上檢測岩心熒光，及時獲取岩心出筒時的物性、含油性特徵原態，在儲集層含油評價中顯示了獨特的優勢，並在對熒光圖像資料進行含油級別和含油性質進行分析評價時，為熒光檢測及其定性與定量分析提供了一種新的技術手段，方便了對岩心熒光圖像和其他資料進行綜合管理和應用，可指導油氣田的進一步鑽探與開發。

含油岩石在紫外光的照射下會激發出熒光，根據熒光的面積、熒光強度來初步確定岩石的含油性，分析內容包括含油麵積、無油麵積、含油麵積率、無油麵積率、熒光強度和評級結果。常規熒光分析中將含油級別粗分為五級:油砂、含油、油浸、油斑、油跡。細分為7級:含油飽滿油砂、不飽滿油砂、含油砂岩、油浸砂岩、油斑砂岩、油跡砂岩、不含油砂岩。熒光分析系統能夠通過前面介紹的圖像處理演算法自動分析熒光掃描圖像中含油麵積、熒光強度等參數，並根據參數進行自動評價。

岩心熒光分析系統能及時採集清晰的岩心熒光圖像，真實直觀地反映了岩心含油的實際情況，以圖像文件的形式保存，建立了岩心熒光綜合圖文庫和管理應用系統，為永久性保存岩心的含油氣現象和特徵提供了有效的工具，為今後的勘探開發研究、分析和應用含油氣岩心資料提供了完整、清晰的數字化圖像。通過對熒光圖像參數特徵的研究，利用熒光圖像飽和度與豐度曲線，為熒光檢測提供了定性和定量分析;綜合應用岩心熒光圖像資料和其他資料進行含油氣評價，可直接提高地質錄井油氣綜合評價的信息化、定量化程度。

1.讀圖

用滑鼠單擊文件菜單後，先選擇讀圖方式，即「網路讀圖」或者「本地讀圖」。如果是「網路讀圖」，點擊「讀圖像」，圖文瀏覽庫中的岩心圖像和圖像信息進行動態導入，分析結果能上傳至伺服器;如果是「本地讀圖」，在點擊「讀圖像」命令後會彈出文件選擇框，在文件選擇框里選擇所要讀入的圖像，如圖5-68所示。

圖5-68 打開文件

2.圖像預處理

圖像預處理的作用是提高圖像質量，為提出准確圖像目標打下基礎。

3.設置處理框

圖像處理框是用來設置圖像分析區域的，如圖5-69所示。

圖5-69 設置處理框

4.熒光圖像目標提取

如圖5-70所示。

圖5-70 目標提取

5.圖像目標修改增強

可用特徵提取或者手工修改，使提取目標更加准確。

6.成分分析

在分割圖像後則可對分割出來的目標進行瀝青質分類操作。瀝青質分類有粗分和細分兩種。點擊菜單中的「粗分」則對圖像目標進行粗分，同樣點擊「細分」進行進一步細分。如果認為「粗分」和「細分」的效果還不夠理想，則可啟用人工交互分類，如圖5-71所示。

圖5-71 成分分析

圖5-72 數據瀏覽

7.參數計算

選中菜單中的參數計算，系統將自動統計出分析數據。

8.數據瀏覽

選中「查看」菜單中的「數據瀏覽」命令，彈出「數據瀏覽」對話框，從中便可瀏覽和修改分析數據。操作如圖5-72所示。

9.報表預覽和數據保存

選中菜單中的數據瀏覽項，彈出「數據瀏覽」對話框，便可瀏覽和修改分析數據。選擇報表預覽中「另存為」中的不同保存格式，即可將報表數據保存在分析員指定的位置，如圖5-73所示。

單塊岩心熒光圖像分析

圖5-73 熒光報表

㈤ 毛細管電泳激光誘導熒光原理是什麼謝謝

建立了毛細管電泳�激光誘導熒光檢測(CE�LIFD)技術測定人血漿中富馬酸比索洛爾含量的新方法。選用熒光素異硫氰酸酯（FITC）為衍生化試劑，當緩沖溶液為25 mmol/L Na2B4O7（pH 9.2）、分離電壓25 kV、柱溫20 ℃、電動進樣（10 kV×8 s）、以峰面積內標法定量、於激發波長/發射波長= 488/520 nm柱上檢測時，富馬酸比索洛爾得到較好分離。在選定的電泳條件下，對其線性范圍(20～1000 μg/L)、檢出限(10 μg/L)、重現性(日內和日間精密度分別小於4.44%和5.59%)和回收率（96.19％～101.80％）進行了測定。結果表明： 遷移時間的重現性＜1.58%；峰面積之比的重現性＜6%。

准確稱取富馬酸比索洛爾和酒石酸美托洛爾各5 mg，加水溶解，分別定容至50 mL，配製成100 mg/L 標准儲備液，4 ℃冰箱放置，備用。

准確稱取5 mg FITC溶於5 mL乙腈中，配製成2.5 mmol/L儲備液，臨用前用乙腈稀釋至所需濃度。

2.3 空白血漿的制備

健康人空腹，於肘靜脈處取血，放於裝有肝素鈉抗凝劑的離心管中，30 ℃靜置，然後以3000 r/min 離心10 min，取上清液於另一離心管中，－20 ℃冰箱中冷藏備用。

2.4 生物樣品前處理

取肝素化的含葯血漿1 mL，置10 mL 離心管中，同時加入20 μL 內標溶液，加0.2 g NaCl及50 μL濃氨水，旋渦振盪30 s 後，加入醋酸乙酯3.0 mL。為防止乳化現象,於室溫下靜置2 min 後，再用快速混勻儀混旋提取1 min，以3000 r/min 離心3 min，移取上層有機層至另一離心管中，40 ℃下N2 流吹乾，得富馬酸比索洛爾和內標的殘留物。

2.5 熒光衍生化反應

在上述殘留物中加入0．5 mmol/L FITC 乙腈液400 μL，再加入200 mmol/L Na2HPO4水溶液200 μL和400 μL水，室溫，暗處放置過夜。衍生後產物用水稀釋至2 mL，上機分離。

2.6 實驗方法

將血樣進行預處理，以FITC為衍生化試劑，考察影響衍生化的重要因素，並用美托洛爾為內標物，確定富馬酸比索洛爾衍生物與其分離的最佳電泳條件。實驗前，緩沖液超聲脫氣10 min，每天開機時分別用0.1 mol/L NaOH、超純水、緩沖液沖洗毛細管柱3 min，運行5次後更換新的緩沖液，以確保分析結果的重現性。

希望能對你有幫助

㈥ 如何去除熒光定量pcr 中的背景值

背景校正程序測量定量PCR儀所使用的反應管和水的空白熒光強度。在運行校正程序期間，定量PCR儀在10分鍾內連續讀取背景校正板的熒光強度，信號收集的溫度為60°C。隨後，SDS軟體計算所收集到的熒光強度的平均值，提取結果並保存到校正文件中。軟體在今後的分析中將自動調用此校正文件，從實驗數據中扣除背景信號。
什麼是純熒光校正，多長時間校正一次：
純熒光校正是測定各種純熒光染料標准品的波長和信號強度，通俗地說是讓儀器「認識」各種熒光染料。軟體收集並儲存各種純熒光染料標准品的熒光信息。以後每次定量實驗運行過程中，SDS軟體收集樣品的原始光譜信號，並將此原始光譜與純熒光文件中的數據進行比較，精確扣除不同染料的信號重疊部分，從而確定樣品中的熒光染料種類和信號強度。
推薦每半年進行一次純熒光校正。在運行光譜校正之前，請先進行背景校正和ROI校正。

㈦ 請問葉綠素熒光測定的原理及其意義

葉綠素熒光現象是由傳教士Brewster首次發現的。1834年Brewster發現，當一束強太陽光穿過月桂葉子的乙醇提取液時，溶液的顏色變成了綠色的互補色¬¬——紅色，而且顏色隨溶液的厚度而變化，這是歷史上對葉綠素熒光及其重吸收現象的首次記載。後來，Stokes（1852）認識到這是一種光發射現象，並使用了「fluorescence」一詞。1874年，Müller發現葉綠素溶液稀釋後，熒光強度比活體葉子的熒光強得多。盡管Müller提出葉綠素熒光和光合作用之間可能存在相反的關系，但由於他的實驗沒有對照，實驗條件控制不嚴格，因此人們並沒有將葉綠素熒光誘導（瞬變）現象的發現歸功於Müller。
Kautsky是公認的葉綠素熒光誘導現象的發現者。1931年，Kautsky和Hirsch用肉眼觀察並記錄了葉綠素熒光誘導現象(Lichtenthaler，1992；Govindjee，1995)。他們將暗適應的葉子照光後，發現葉綠素熒光強度隨時間而變化，並與CO2的固定有關（圖3.1）。他們得到的主要結論如下：1）葉綠素熒光迅速升高到最高點，然後下降，最終達到一穩定狀態，整個過程在幾分鍾內完成。2）曲線的上升反映了光合作用的原初光化學反應，不受溫度（0℃和30℃）和HCN處理的影響。若在最高點時關掉光，則熒光迅速下降。3）熒光強度的變化與CO2的固定呈相反的關系，若熒光強度下降，則CO2固定增加。這說明當熒光強度降低時，較多的光能用於轉變成化學能。4）奇怪的是（照光後）CO2的固定有一個延滯期，似乎說明「光依賴」的過程對CO2固定過程的進行是必需的。另一個未得到解釋的現象是若在熒光誘導結束後關掉光，則熒光水平的恢復需要很長時間。在Kautsky的發現之後，人們對葉綠素熒光誘導現象進行了廣泛而深入的研究，並逐步形成了光合作用熒光誘導理論，被廣泛應用於光合作用研究。由於Kautsky的傑出貢獻，葉綠素熒光誘導現象也被稱為Kautsky效應（Kautsky Effect）。
1983年，WALZ公司首席科學家，德國烏茲堡大學教授Ulrich Schreiber博士利用調制技術和飽和脈沖技術，設計製造了全世界第一台脈沖振幅調制（Pulse-Amplitude-Molation，PAM）熒光儀——PAM-101/102/103。
所謂調制技術，就是說用於激發熒光的測量光具有一定的調制（開/關）頻率，檢測器只記錄與測量光同頻的熒光，因此調制熒光儀允許測量所有生理狀態下的熒光，包括背景光很強時。正是由於調制技術的出現，才使得葉綠素熒光由傳統的「黑匣子」（避免環境光）測量走向了野外環境光下測量，由生理學走向了生態學。
所謂飽和脈沖技術，就是打開一個持續時間很短（一般小於1 s）的強光關閉所有的電子門（光合作用被暫時抑制），從而使葉綠素熒光達到最大。飽和脈沖（Saturation Pulse, SP）可被看作是光化光的一個特例。光化光越強，PS II釋放的電子越多，PQ處累積的電子越多，也就是說關閉態的電子門越多，F越高。當光化光達到使所有的電子門都關閉（不能進行光合作用）的強度時，就稱之為飽和脈沖。
打開飽和脈沖時，本來處於開放態的電子門將該用於光合作用的能量轉化為了葉綠素熒光和熱，F達到最大值。
經過充分暗適應後，所有電子門均處於開放態，打開測量光得到Fo，此時給出一個飽和脈沖，所有的電子門就都將該用於光合作用的能量轉化為了熒光和熱，此時得到的葉綠素熒光為Fm。根據Fm和Fo可以計算出PS II的最大量子產量Fv/Fm=(Fm-Fo)/Fm，它反映了植物的潛在最大光合能力。
在光照下光合作用進行時，只有部分電子門處於開放態。如果給出一個飽和脈沖，本來處於開放態的電子門將該用於光合作用的能量轉化為了葉綠素熒光和熱，此時得到的葉綠素熒光為Fm』。根據Fm』和F可以求出在當前的光照狀態下PS II的實際量子產量Yield=ΦPSII=ΔF/Fm』=(Fm』-F)/Fm』，它反映了植物目前的實際光合效率。
在光照下光合作用進行時，只有部分電子門處於關閉態，實時熒光F比Fm要低，也就是說發生了熒光淬滅（quenching）。植物吸收的光能只有3條去路：光合作用、葉綠素熒光和熱。根據能量守恆：1=光合作用+葉綠素熒光+熱。可以得出：葉綠素熒光=1－光合作用－熱。也就是說，葉綠素熒光產量的下降（淬滅）有可能是由光合作用的增加或熱耗散的增加引起的。由光合作用的引起的熒光淬滅稱之為光化學淬滅（photochemical quenching, qP）；由熱耗散引起的熒光淬滅稱之為非光化學淬滅（non-photochemical quenching, qN或NPQ）。光化學淬滅反映了植物光合活性的高低；非光化學淬滅反映了植物耗散過剩光能為熱的能力，也就是光保護能力。
光照狀態下打開飽和脈沖時，電子門被完全關閉，光合作用被暫時抑制，也就是說光化學淬滅被全部抑制，但此時熒光值還是比Fm低，也就是說還存在熒光淬滅，這些剩餘的熒光淬滅即為非光化學淬滅。淬滅系數的計算公式為：qP=(Fm』-Fs)/Fv』=1-(Fs-Fo』)/(Fm』-Fo』)；qN=(Fv-Fv』)/Fv=1-(Fm』-Fo』)/(Fm-Fo)；NPQ=(Fm-Fm』)/Fm』=Fm/Fm』-1。
當F達到穩態後關閉光化光，同時打開遠紅光（Far-red Light, FL）（約持續3－5 s），促進PS I迅速吸收累積在電子門處的電子，使電子門在很短的時間內回到開放態，F回到最小熒光Fo附近，此時得到的熒光為Fo』。由於在野外測量Fo』不方便，因此野外版的調制熒光儀（除PAM-2100和WATER-PAM）外，多數不配置遠紅光。此時可以直接利用Fo代替Fo』來計算qP和qN，盡管得到的參數值有輕微差異，但qP和qN的變化趨勢與利用Fo』計算時是一致的。由於NPQ的計算不需Fo』，近10幾年來得到了越來越廣泛的應用。
根據PS II的實際量子產量ΔF/Fm』和光合有效輻射（Photosynthetically Active Radiation, PAR）還可計算出光合電子傳遞的相對速率rETR=ΔF/Fm』·PAR·0.84·0.5。其中0.84是植物的經驗性吸光系數，0.5是假設植物吸收的光能被兩個光系統均分。

到處是葉綠素熒光的資料，非要我粘貼到這里。。。。

㈧ 設計一個檢測某一基因是否轉錄的檢測方法的實驗，簡述其過程與原理。

如果此轉錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，從而對基因的表達起抑制或增強的作用，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性：（1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質粒，熒光素酶與底物反應，如pgl3-basic等。（3）
加入特定的熒光素酶底物轉錄因子是一種具有特殊結構，也稱為反式作用因子。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
assay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段，這些特異性的序列被稱為順式作用元件、行使調控基因表達功能的蛋白質分子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合。（2）
將要檢測的轉錄因子表達質粒與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系，轉錄因子的dna結合域和順式作用元件實現共價結合。其原理簡述如下，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用，熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比，產生熒光

㈨ 請問：做熒光定量PCR時，△△Ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼

△△Ct是熒光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n為擴增反應的循環次數，X₀為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（內參基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。

起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

(9)日光誘導熒光提取演算法擴展閱讀

熒光定量PCR的原理：

熒光定量PCR技術：在PCR反應體系中加入熒光基團，通過熒光信號不斷累積而實現實時監測PCR全程，然後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中，對全程PCR擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和熒光信號的變化可以繪製成一條曲線。

實時熒光定量常用的熒光化學分類有SYBR Green I法和Tag Man探針法。

Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。